正就读中学的少年老尔斯（沙梅克·摩尔 Shameik Moore 配音）不测被一只遭受放射性净化的蜘蛛咬伤，随后身体产生奇异的转变。有时机缘，他目击了蜘蛛侠（克里斯·派恩 Chris Pine 配音）和犯法头子金并（列维·施瑞博尔 Liev Schreiber 配音）的战役。为了阻止金并行使时空对撞机侵扰宇宙，蜘蛛侠终极壮烈牺牲。可未过多久，来自平行宇宙的颓废的彼德·帕克（杰克·约翰逊 Jake M. Johnson 配音）出如今迈尔斯面前。为了阻止金并的阴谋，并赞助这个帕克返回自己的宇宙，他们闯入金并的老巢。在这一过程当中，二人遭到章鱼博士和盘桓者的狙击。与此同时，来自其他宇宙的女蜘蛛侠、阴影蜘蛛侠、蜘猪侠、二次元蜘蛛妹相继出现。 他们协力与恶权势睁开奋斗……
